Antes de hacer un experimento debemos pensar cuál es la pregunta que queremos responder y si tenemos los controles positivos y negativos que nos ayuden a saber si hemos respondido correctamente la pregunta. ¿Sabes distinguir una falso positivo y un falso negativo?
Extracción de ADN con material de cocina. Fuente: Jesús A. G. Ochoa de Alda
¿Cómo actúa el bicarbonato?
¿Cómo actúa el detergente?
Los detergentes tienen normalmente curvatura espontánea positiva
Purificación de ADN por precipitación salina diferencial
Cuantificar ADN: la importancia de una curva de dilución
En la espectrometría de absorción, se compara la intensidad de un haz de luz medida antes y después de la interacción con una muestra. La absorbancia mide la cantidad de luz que ha "absorbido" las proteínas en la disolución. Si no tenemos proteínas la absorbancia será cero. De hecho podemos utilizar el tubo sin proteínas como blanco en el espectrofotómetro. La solución más concentrada de proteínas deberá tener una absorbancia sobre 0.9. Valores más altos de absorbancia dejan de tener una relación lineal con la concentración de proteínas
¿Qué significa límite de linealidad en una curva de calibrado? ¿Qué significa límite detectable en un experimento de espectrofotometría?
Concentración y pureza del ADN por espectrofotometría
Mediante espectrofotometría se puede determinar la concentración y la pureza de una muestra de ADN basándose en la capacidad de absorbancia de un compuesto presente en una solución a una longitud de onda determinada.
De este modo, la concentración de la muestra de ADN se calcula teniendo en cuenta el valor de absorbancia obtenido a una longitud de onda de 260nm. Mientras que la relación de absorbancias A260/280 y A260/230 se utilizan para evaluar la pureza de las muestras. La relación A260/280 es muy estable y se considera que un ADN de pureza óptima tiene un valor entre 1.8-2.0. Un ADN de pureza aceptable debe tener al menos una relación A260/280 > 1.6.
Un valor A260/280 < 1.6 indica una posible contaminación por compuestos aromáticos como fenoles y proteínas. Un ratio A260/280 > 2.1 podría deberse a la presencia de ARN en la muestra. A 230nm absorben contaminantes como sales caotrópicas (urea), fenoles o carbohidratos.
Referencias:
Extracción de ADN con material cotidiano
Biología molecular e ingeniería genética. Ángel Hérranz. Ed Elsevier. 2ª edición. Página 135
Extracción ADN
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