Cuantificación de proteínas

Esta práctica de laboratorio comprende la elaboración de diluciones seriadas, a partir de una solución madre de BSA para construir una curva estándar de cuantificación de proteínas; la medición de la cantidad de proteínas de los extractos por el método de Bradford mediante espectrofotometría; y el cálculo de su concentración.

Aparatos, equipos e instrumentos                           Cantidad              Requisitos técnicos

Espectrofotómetro                                                            1                          calibrado

Balanza analítica                                                              1                          calibrada

Juego de Micropipetas (10, 100 y 1000 ul)                      5                           calibradas

Materiales                                                                Cantidad              Especificaciones

Celdas de espectrofotómetro                                          25          

Pipetas Pasteur de 1,5mL                                               10 unidades      

Guantes de látex                                                             20 pares              Talla S, M y L

Guardianes                                                                       3 unidades        

Puntas de micropipetas                                                   2 rack por cada una       

Tubos eppendorf de 1,5ml                                             12          

Cajas con hielo                                                                 5                        5x5cm aproximadamente

Papel aluminio  Medio rollo        

Reactivos                                                                  Cantidad              Especificaciones

PBS                                                                                  5ml       

BSA                                                                                 5mg      

Reactivo de Braford                                                        4 ml      

Agua destilada                                                               20 ml    

Muestra de proteínas extraídas 10ul cada grupo 

             

Descripción del procedimiento

Curva estándar con BSA:

• Para realizar la curva del estándar preparar por duplicado 5 diluciones medias en PBS de la proteína estandar (BSA) entre 20 mg/ml a 0 mg/ml. También incorporar a la curva el valor "blanco" (PBS solo).

• Realizar 2 diluciones seriadas de las muestras

Cuantificación de Proteínas:

• Colocar 200 μl del reactivo de Bradford en cada celda del espectrofotómetro que se va a utilizar.
• Incubar a temperatura ambiente por un mínimo de 5 minutos. Pasamos nuestras muestras a las celdas de espectrofotómetro.

Espectrofotómetro y celda de espectrofotómetro (en mis dedos). El punto rojo se ha dibujado para mostrar por donde atravesará la muestra el haz de luz

 • Medir la absorbancia a 595 nm en el espectrofotómetro

En la espectrometría de absorción, se compara la intensidad de un haz de luz medida antes y después de la interacción con una muestra. La absorbancia mide la cantidad de luz que ha "absorbido" las proteínas en la disolución. Si no tenemos proteínas la absorbancia será cero. De hecho podemos utilizar el tubo sin proteínas como blanco en el espectrofotómetro. La solución más concentrada de proteínas deberá tener una absorbancia sobre 0.9. Valores más altos de absorbancia dejan de tener una relación lineal con la concentración de proteínas.

• Con los valores obtenidos, construir la curva de calibración y calcular la concentración de nuestras muestras problema. Para ello podemos calcular la ecuación de una recta con excell

1 PREGUNTA¿Qué significa límite de linealidad en una curva de calibrado? ¿Qué significa límite detectable en un experimento de espectrofotometría?

Fuente

2 PREGUNTA: ¿Qué podemos hacer si la concentración de nuestra muestra excede el límite de linealidad?

3 PREGUNTA: ¿Qué función tiene el reactivo de Bradford en este experimento?

Solución: La determinación de proteínas por el método de Bradford consiste en la cuantificación de la unión de un colorante, el Azul de Coomassie G-250, a la proteína, comparando esta unión con la de diferentes cantidades de una proteína estándar albúmina de Suero Bovino (BSA)

4 PREGUNTA: ¿Por qué es mejor hacer una dilución seriada a simplemente tomar los microlitros de una solución stock concentrada y diluirlos?

5 PREGUNTA: La siguiente curva de calibrado está expresada por una ecuación A = mC + 0.058. ¿Cómo hacemos experimentalmente para reducir el valor 0.058 a cero?

6 PREGUNTA: Realiza la curva de calibrado con una dilución de BSA. La solución madre de BSA de la que partimos es de 200 mg/ml. El volumen final es de 1 ml. Para preparar la solución problema hemos cogido 25 ul del extracto proteico y le hemos añadido Bradford y PBS para llegar a un volumen final de 1 ml. Halla la media y extrapola la concentración de una muestra problema con una absorbancia de 0.6. 

7 PREGUNTA: Considerando que usted midió la absorbancia de cada una de las soluciones que preparó y construyó la siguiente curva, con su ecuación y valor de R . Calcule la concentración de proteínas de su muestra que presentó una absorbancia de 0.25nm

8 PREGUNTA:  La siguiente curva de calibrado está expresada por una ecuación A = 0.0911C + 1.0659. ¿Cómo el espectrofotómetro detecta 1.0659 si la concentración de proteína es cero?  ¿Cómo hacemos experimentalmente para reducir el valor 1.0659 a cero?

Y si baja la natalidad ¿Para qué tantos maestros?

Y si baja la natalidad ¿Para qué tantos maestros?

https://elpais.com/sociedad/2018/12/11/actualidad/1544552685_545152.html

Los árboles y las árbolas no os dejan ver el bosque y la bosca

 Frente a la inestabilidad, los partidos que prometen el "juntos seremos más fuertes", es decir, la lógica del rebaño, no cesarán de ganar votos. 

Los español@s quieren tener hijos pero la situación económica no se lo permite. Además, muchos hombres perciben que tener hijos no es buen negocio. La falta de políticas de redistribución de la riqueza, la corrupción, la robotización, la falta de ayudas a la natalidad... lo cierto y verdad es que  después de la crisis económica de 2008 muere más gente que nace en España, como se puede ver en la gráfica presentada por el Instituto Nacional de Estadística Español.

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La caída de la natalidad y el cambio de estructura familiar provocará un tsunami social. No se podrán pagar las pensiones de jubilación ni muchos de los servicios a los que estamos acostumbrados.

Nos enfrentamos a un mundo nuevo. Ya nada será como antes. Se buscarán culpables y la primera víctima será el contrato social. Aunque ese contrato ya se empezó a romper y aquí muestro tres de esos ataques: diferencias en los tipos de contratos, la existencia de emigrantes alegales y las leyes de género. Desde la izquierda (y también desde alguna derecha) se propone un salario social. Un salario sólo al alcance de los nacionales. Grupos como Vox proponen expulsar a la inmigración ilegal. En un mundo en donde se mueren más de los que nacen los problemas sólo se arreglaran si se consiguen unas reglas en las que quepamos todos.

Contratos para ciudadanos de primera y de segunda

Los sindicatos han luchado muy justamente por la mejora de las condiciones laborales de los trabajadores a través de los convenios laborales. El problema ha sido cuando existen distintos tipos de contratos. Existe una fractura generacional entre personas mayores con contratos indefinidos y gente joven precaria, tan precaria, que son incapaces de soñar un mundo distinto. En mi experiencia, yo tenía un contrato por 5 años que se tenía que hacer fijo. No me podían hacer fijo porque estaba contratado por el Servicio Galego de Saude. Para entrar en plantilla tendrían que hacerme una oposición, como eso no era posible me daban la alternativa de contratarme como licenciado, siendo doctor, en un puesto de analista de riesgos laborables para desde allí hacer investigación con un contrato precario. ¿Es eso justo? no. Qué en mi hospital hubiese un tipo que tenía un trabajo que ya no era necesario, como es el de sacar fotocopias, en un momento en el que podemos sacar fotos con los celulares e imprimirlas si hiciese falta, con su oposición, al que no se puede echar... eso a nadie le parecía mal. Cuando un partido, como Ciudadanos, ofrece un contrato único, desde el mundo sindical se ve como un ataque a los mejoras laborales conseguidas ¿De quiénes? ¿De todos? A mi me hubiese beneficiado un contrato único porque me hubiese dado cabida en el sistema en igualdad de condiciones. Es la desigualdad la que rompe el contrato social y genera sentimientos mezquinos como: Las mejoras laborales o se consiguen para todos o para ninguno porque cuando estás en el lado malo de la balanza prefieres que todos estemos mal a que unos estemos bien y otros mal. Por ese motivo, una renta social para todos los nacionales seguirá siendo un parche al problema. Pagamos a los de dentro,expulsamos a los de fuera que quieren entrar en nuestro club exclusivo

La clase media se ha vuelto pobre y no es culpa de los emigrantes

Los emigrantes ilegales compiten con las personas de menor preparación en las naciones desarrolladas. Estas personas votan y votarán a aquellos que perciban que van a a arreglar sus problemas. Las personas de mayor formación no se verán afectados por la inmigración ilegal por eso condenan el racismo. Ellos son clase media porque todavía pueden consumir productos fabricados en países sin derechos laborales. Algún día dejarán inexorablemente de serlo cuando las clases medias se desplacen de países que antaño fueron industriales por los que ahora detentan este estatus. Los inmigrantes ilegales compiten con las personas menos preparadas en los países europeos y los países sin costos laborales se están llevando cada vez más los trabajos a sus países. Mientras tanto, vivimos la ficción de ser una clase media "low cost" comprando productos muy baratos que si no fuese por ese precio no nos podríamos costear.

Mi amigo Ernesto Carmena me dijo un día, y fue muy certero en su juicio, en mi opinión: "No es que no se pueda tener hijos, es que no quieren tener hijos de pobre". Evidenciaba de esta manera el hecho de que en España, esa España que nos quieren hacer creer que se vive muy bien, la clase media es pobre y no quiere creérselo. Podrían tener hijos de pobre, y pasarse los fines de semana en el parque, como ocurre acá, en el Ecuador, pero prefieren no enfrentarse a esa realidad comprando en sitios baratos como Decathlon, viajando en líneas "low cost" y tomando cañas en los bares.

Necesitamos emigrantes en España. Los necesitamos con papeles. Necesitamos comprar productos en países que tengan derechos laborales. Necesitamos que el contrato social abarque todo el planeta. Necesitamos una buena redistribución de la riqueza.

Leyes de género: cuando la justicia es como un péndulo y ahora toca del otro lado

En España el porcentaje de hombres que no desea tener hijos es mayor que el porcentaje de mujeres. Muchos hombres jóvenes perciben que la paternidad no es un buen negocio para ellos. A raiz del discurso de Vox en las elecciones andaluzas de diciembre 2018, atacando a las leyes de género, han sido muchos los comentaristas que han enfatizado sobre el hartazgo que suscitan las leyes de género. No voy aquí a abundar en ello. Sinceramente creo que las familias y las relaciones personales nunca más van a ser lo que eran. La biología nos premia con endorfinas que generamos al tener sexo. La química en el futuro nos proveerá de análogos de endorfinas porque la química tiene la tecnología y el proceso industrial hará que se abaraten. La computación y los mundos virtuales harán que el placer se pueda asociar a otro tipo de actividades en donde el humano interactuará con computadores y robots cada vez más adaptados a los gustos del consumidor. Sólo tendrán hijos los grupos religiosos fundamentalistas y aquellos que tengan el deseo de tener a quien dejar su fortuna. Luego estarán los que estén fuera del sistema.

La fragata construida en Ferrol y que se hundió estaba tripulada por un 80% de mujeres. Las mujeres son un 20% de las fuerzas armadas noruegas ¿Pudo tenerse más en cuenta en el proceso el sexo que la preparación?. Fuente

A esta señora le dieron un premio negativo, el Filoxera, pagado con dinero público, por mantener una postura crítica frente a las leyes de género.

 

El tono de la Sra. Carril es calmado y emotivo ¿Y los datos? Habría que analizarlos y ver si los está deformando, sin embargo, como ella dice, todos conocemos a amigos, compañeros de trabajo, primos... que están en la situación que describe. Hay una realidad social y sólo desde esta extrema derecha se le está dando voz

El discurso actual de la extrema derecha promete y no cumplirá integrar a muchos de los que se sienten excluidos

Vox con su discurso xenófobo antiemigrantes y contra las leyes de género están creando un discurso atractivo para parte de la población: no vas a tener un contrato de mierda porque todos los contratos serán iguales, no te va a quitar el trabajo un emigrante, no te van a quitar a los hijos por ser hombre. No es que Cataluña se vaya, es que desde Andalucía vamos a reconquistar España. Una idea integradora, aunque sea a la fuerza. Ciudadanos y Vox no pretenden crear un consenso y un contrato social. Lo van a romper, van a separar a la población en buenos y malos españoles. Luego los atacarán. Que no os quepa duda. Sin embargo, su discurso actual integra en el sistema a muchos que se sienten excluidos.

Hemos visto como las estadísticas nos muestran que en España se quiere tener hijos pero no se quiere tener hijos de pobre. Y no es por falta de riqueza. Galicia tiene 2.7 millones de habitantes, Quito tiene 2.5 millones. Siempre me sorprendo de la cantidad de industria que hay en Galicia comparada con la que se observa en los alrededores de Quito. ¿Cómo es posible que existan salarios tan bajos y una natalidad tan exigua? la solución es la poca redistribución de la riqueza, existencia de privilegios de clase, enchufismos (palancas) y clasismo financiado con dinero público como la educación concertada. Ciudadanos y Vox tienen políticas contrarias a la redistribución de la riqueza. Vox apoya la supresión del impuesto de sucesiones y eliminar el IRPF progresivo, es decir, que los que más ganan paguen más impuestos. Millonarios de los EEUU criticaron la bajada de impuestos anunciada por Trump porque en su opinión eso haría que el país dejase de ser una meritocracia al ser los ricos solamente ricos por herencia y no por su trabajo. Por lo tanto, estas políticas no van a dar los frutos que prometen.

Para acabar. Con la gráfica de caída de la natalidad y aumento de la mortalidad que hemos visto arriba del artículo nos situamos en un escenario nuevo. Estamos perdiendo población y no es a causa de una guerra. La población que se pierde son básicamente niños que no nacen. Mientras tanto, vivimos en un mundo diseñado con tasas de natalidad más altas. Las políticas que se discuten pertenecen a un mundo en donde los niños al crecer tenían más niños y ese escenario ya no es el nuestro. ¿Cómo crearemos un nuevo contrato social para este sociedad que ya no tiene la reproducción como horizonte?


Algunas noticias interesantes analizando el fenómeno del auge de la extrema derecha en Andalucía en las pasadas elecciones de diciembre 2018:

https://www.meneame.net/story/hagamos-autocritica-verdad
https://www.elmundo.es/opinion/2018/12/03/5c03e0b4fc6c83666c8b45d4.html
https://www.meneame.net/story/os-dieron-cula-pues-mal-suerto
https://www.meneame.net/story/critica-izquierda-actual-uno-izquierdas

El estudio no os hará libres

 

El sistema de notas es algo bien perverso. Aprobar, conseguir un título, no te garantiza nada. Las notas tienen ese tipo de perversión que se podía leer en la entrada de los campos de concentración: "El trabajo os hará libres". Trabajo iban a tener, eso si, la libertad era simplemente una zanahoria para tenerlos controlados. Estudia y tendrás un porvenir. Bueno, estudiar vas a estudiar, lo del porvenir ya se verá. Ahora bien, si traspasas la puerta del recinto académico debes de saber que existen unas reglas, que hay que conocer, para poder jugar a este juego. Las reglas están descritas en el sílabo y la rúbrica. El sílabo es como un contrato entre el alumno y el profesor. En él se dice cuanta materia y cómo se va a evaluar. En la rúbrica se explica qué es lo que tiene que aprender el alumno y cómo se le va a evaluar ese conocimiento.

"No entiendo que es lo que pasa. Yo entiendo bien sus clases y estudio, he asistido a las tutorías, pero eso no es lo que reflejan mis notas..." "La verdad es que no me siento nada bien con las notas que tengo..."

No merece la pena pedir la recuperación de notas si esa recuperación no está en el sílabo. Si un profesor hace exámenes de recuperación que no está en el sílabo está mandando un mensaje erroneo y  equivocado: "Hay reglas pero las reglas se pueden cambiar si yo quiero siempre que un alumno me ruegue mucho". Las reglas son un contrato social que todos debemos de respetar. Nos ponemos de acuerdo en esas reglas "a priori". Por supuesto, las reglas se pueden cambiar, pero tiene que ser de mutuo acuerdo, no en función de necesidades personales.

El sistema de notas académico es perverso y sádico. Un reflejo de los golpes reales que te dará más adelante la vida

Las notas no evalúan a la persona, sólo su desempeño en el sistema de reglas académico. Debemos transmitir esto al alumno. Si un alumno suspende es porque no ha estudiado, o porque debe de tomar menos asignaturas porque su capacidad de trabajo no está a la altura de lo que se exige. Si esto ocurre, no pasa nada por hacer una carrera de 5 años en 8.

Ojo con las calificaciones. Hay que ser muy muy muy despegado en este sentido. La mejor evaluación es en la que no se tiene en cuenta al alumno. Sólo ver el sílabo la rúbrica y actuar en consecuencia. Si no tenemos esto claro puede llegar a haber goce en poner las calificaciones finales y eso, sencillamente, no está bien.

Cuando digo que el estudio no os hará libres es porque la libertad no está en sacar una carrera o tener buenas notas, es algo que depende de lo nosotros queremos. Saber lo que uno quiere... una pregunta que solo la responden aquellas personas que son muy honradas con ellas mismas.

Estudia que llegarás lejos

Una de las consecuencias de la calificación profesional es tener que irte lejos de tu lugar de origen. Los centros industriales se concentran en pocas áreas en el planeta. Por ese motivo, muchos gallegos, ecuatorianos... tienen que emigrar a Alemania, Estados Unidos... es una consecuencia de adquirir habilidades que no vas a poder desarrollar en tu propio país.

¿Qué tal tu hijo, acabó la carrera? Donde va que la acabó, ya está en cuarto año de diáspora. Autor Davila.

Un trabajo realizado por tres investigadores del Banco de Italia concluye que, en Italia, y esto se puede extrapolar al resto del mundo, a mayor cualificación de la mano de obra en las zonas pobres del país, mayor volumen de emigración.

Niños envenenados por médicos altamente especializados

Anita Novinsky es una de las fundadoras del Laboratorio de Estudios sobre la Tolerancia de la Universidad de Sao Paulo. Como educadora también expresa sus dudas sobre el papel que ha cumplido la educación hasta el momento en la historia en su siguiente texto:

“Querido profesor:

Soy una sobreviviente de un Campo de Concentración. Mis ojos vieron lo que ningún ser humano debería testimoniar: Cámaras de gas construidas por ingenieros ilustres, niños envenenados por médicos altamente especializados. Recién nacidos asesinados por enfermeras diplomadas, mujeres y bebés quemados por personas formadas en escuelas, liceos y universidades.

Por eso, querido profesor, tengo serias dudas acerca de la educación, y le ruego: ayude a sus estudiantes a volverse humanos. Su esfuerzo, profesor, nunca debe producir monstruos eruditos y cultos, psicópatas y Eichmans educados. Leer y escribir son importantes solamente si están al servicio de hacer a nuestros jóvenes seres más humanos”.

Para saber más:

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/pirs.12439

Extracción de proteínas

 Ojo: necesitaremos llevar a la práctica 10 gramos de hígado

Obtendremos un extracto de proteínas a partir de muestras biológicas mediante métodos de lisis y precipitación en frío

Aparatos, equipos e instrumentos	Cantidad	Requisitos técnicos
Microcentrífuga refrigerada	1	Para tubos eppendorf 1,5ml
Centrífuga refrigerada	1	Para tubos falcon de 15ml
Micropipetas (1000 ul)	5	calibradas
Balanza analítica	1	calibrada
Refrigeradora	1

Materiales	Cantidad	Especificaciones
Mortero con vástago	5
Pipetas Pasteur de 1,5mL	10 unidades
Guantes de látex	20 pares	Talla S, M y L
Guardianes	3 unidades
Puntas de micropipetas de 1000uL	3 rack
Tubos eppendorf de 1,5ml	12
Tubos falcón de 15ml	12
Cajas con hielo	5	5x5cm aproximadamente
Reactivos	Cantidad	Especificaciones
PBS	20 ml	Frío: NaCl 137 mM, Fosfato 10 mM, KCl 2,7 mM, pH 7,4
Sulfato de amonio saturado	5 ml	Frío
Agua destilada	10 ml	Fría

Extracción de proteínas

1. Pesar 10g de muestra biológica (hígado o carne).
2. Colocar un trozo de tejido en el mortero sobre el hielo. Agregar 1500 μl PBS.
Homogeneizar con el vástago hasta disgregar el tejido.
De ser necesario agregar más PBS para seguir disgregando (anotar el volumen extra agregado)
Tomar el extracto líquido con micropipeta (utilizando p1000) evitando aspirar los trozos menos disgregados de tejido.
3. Centrifugar 15 minutos a 14.000 rpm a 4°C
4. Colocar el sobrenadante en un tubo de 1,5 ml y conservar en hielo.

*PBS (buffer fosfato salino): NaCl 137 mM, Fosfato 10 mM, KCl 2,7 mM, pH of 7,4

Precipitación con Sulfato de amonio

5. Realizar las diluciones de la solución saturada de SO4(NH4)2 indicadas a continuación:

% Solución saturada de Sulfato de amonio	0	70	30	100
Volumen de agua (ul)	500	150	350	-
Volumen de Sulfato de amonio saturado (ul)	-	350	150	500

6. Rotular en la tapa 4 tubos con el % de sulfato de amonio agregado y el Número de grupo de trabajo (ejemplo para el grupo 4: 30% G4) Agregar en cada uno 100 μl del extracto crudo de proteínas.
Agregar 100 μl de las diluciones de SO4(NH4)2 en le tubo correspondiente.
7. Agitar vigorosamente durante unos segundos
8. Centrifugar 10 minutos a 14.000 rpm.
9. Tomar los sobrenadantes obtenidos y pasar a un nuevo tubo con el mismo rótulo, y descartar el tubo con el pellet.
10. Conservar en hielo si se va a cuantificar y sino a -20°C.

PREGUNTAS DE REPASO:

1. ¿Por qué utilizamos sulfato amónico y no sal de cocina (NaCl)?
2. ¿Por qué el sulfato amónico ayuda a que las proteínas precipiten?
3. ¿Por qué se realiza todo el proceso de extracción de proteínas a 4°C?

Dicen que nunca podré ser de Quito

Me he enamorado de los Andes después de subir una cuesta de varios km en bicicleta, agotado, me encontré llaneando, observando los valles profundos, oliendo a humo de leña, tomando una curva, el distinto verde de los campos creaba una sensación rítmica. De repente sentí que estaban experimentando algo que me había causado placer cuando niño en Galicia: ir de la mano de mi abuela semanas antes de su partida, por un camino al final del verano, oler el humo que en esos días es pesado y como que le cuesta ascender, se concentra entre las hojas de los árboles. Algunos verdes comienzan a apagarse y las hojas de la viña amarillean y se vuelven quebradizas. Lo vivido con aquellos que amamos, los momentos en los que tuvimos el tiempo y la calma para percibir los matices vuelven a nosotros y crean un ritmo que nos sosiega y nos recuerda que fuimos felices aunque en aquellos momentos no lo percibimos.

Dicen que nunca podré ser de Quito. Sin embargo, veo en esta ciudad cosas que los quiteños no perciben. No soy de Quito como vosotros sois de Quito. Cuando pasen los años, lo bueno que en esta ciudad me ha pasado, volverá a mi en situaciones que me recordarán lo vivido. De repente el recuerdo de la mole del Rucu entrará en sintonía con el parafraseo del pasillo y las sombras en una piel morena. Esa sensación de repetición me harán despertar y recordar que he sido amado. Mi mano asida por otra mano en una ciudad a la que, en principio, no pertenezco.

Si amigos, yo he matado a Atahualpa

Los españoles hemos robado el oro, y matado a Atahualpa, por lo menos en el Ecuador. Supongo que en Perú será Huascar... No pasa una semana en que no oiga "Uds robaron el oro". Si claro, yo robé el oro antes de ayer. Llevo 500 años dando guerra en la región. Por ese motivo he organizado una práctica de laboratorio para que entiendan que los genes de los que robaron el oro los llevan los latinoamericanos, no los españoles de la península.  

El mestizaje ha sido para América Latina un trauma difícil de digerir: no son indígenas, no son europeos, es más, su herencia europea innegable les recuerda un proceso de violencia cultural muy difícil de digerir.

Quien haya vivido en América Latina se habrá dado cuenta que el mestizaje se vive de una manera incómoda y esquizofrénica. Se ama y se repudia lo indígena, se ama y se repudia lo español (no conozco el caso brasileiro). Esta manera de se, estos traumas, se han plasmado en un arte de resistencia como es el barroco quiteño. 

Los símbolos nacionales también se hacen eco de ese odio a lo español. La primera descripción de los colores que poseía la bandera de la Gran Colombia, se atribuye al político colombiano Francisco Antonio Zea, quien declaró durante su discurso en el Congreso de Angostura de 1819 (congreso en el cual nació la Gran Colombia) lo siguiente:

"Nuestro pabellón nacional, símbolo de las libertades públicas, de la América redimida, debe tener tres franjas de distintos colores: sea la primera amarilla, para significar a los pueblos que queremos y amamos la federación; la segunda azul, color de los mares, para demostrar a los déspotas de España, que nos separa de su yugo ominoso la inmensidad del océano, y la tercera roja, con el fin de hacerles entender a los tiranos que antes de aceptar la esclavitud que nos han impuesto por tres siglos, queremos ahogarlos en nuestra propia sangre, jurándoles guerra a muerte en nombre de la humanidad".

Odiar a lo español, echarle la culpa del atraso al oro robado es una gran excusa para seguir haciendo lo de siempre. Siempre les cuento a mis alumnos el caso de Corea del Sur. Corea fue una colonia japonesa hasta 1945. Después de la II Guerra Mundial tuvieron una guerra local en la que los Norteamericanos lanzaron sobre el país más bombas que las que utilizaron en Europa de 1941-1945. El despegue del país se debe a un compromiso férreo con la educación.

Es un pensamiento esencialista creer que todos los españoles somos los que robaron el oro y violaron a las mujeres, lo se, pero es un mito fundacional de América Latina, lo mismo que la devoción por el Che Guevara y por las vírgenes locales. Es lo que hay.  Por eso nunca seré de Quito.

ULTIMA HORA: EL VERDADERO NOMBRE DE ATAHUALLPA

Todos llaman Atahuallpa al último gobernante del imperio de los Incas, pero su verdadero nombre no era ése, Atahuallpa viene de atha: nudo y wallpa: gallina. Más o menos sería "gallina atada", pensémoslo, quién le pondría de nombre gallina al hijo del soberano de toda Sud América? Además, las gallinas fueron traídas por los españoles, no existían cuando "Atahuallpa" había nacido.

Este apodo le fue puesto al inca por los españoles, al ver que se despedía llorando de su familia al saber que había sido condenado a muerte. Para la posteridad, el cronista Sarmiento de Gamboa, fue el primero en llamarlo "Atahuallpa" como si ése fuera su nombre y no el apodo que le pusieron por haber sido vencido, de manera malintencionada y hasta dolosa.

Con los años, todos llamamos de ese modo a nuestro último soberano legítimo, nada se hizo por aclarar el hecho, pero no es tarde, el nombre de nuestro inca era "Atabalipa", cuyo significado es "hombre fuerte y valiente".

Todos los documentos de inicios de la conquista (1532 - 1560) hablan de Atabalipa, nunca lo llaman Atahuallpa).

* Fuente: congreso latinoamericano de historia indígena

Ejercicios ácidos nucleicos y ADN

1 PREGUNTA: La secuencia de 102 nt de ADN de abajo se digiere con las enzimas de restricción EcoRI, AfaI, SalI y HindIII, en las combinaciones que se pueden ver en los pocillos del gel de agarosa. Cuando se realiza una electroforesis de esta digestión enzimática ¿Cómo quedarían las bandas de ADN?

5’GGAATTTCGCCGGCGATTATTAGGAATTCAGGCCACGTCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACGCCATGCGCGATGTTAC 3'

Resultado: pincha aquí

Corte con EcoRI G/AATTC

5’GGAATTTCGCCGGCGATTATTAGGAATTCAGGCCACGTCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACGCCATGCGCGATGTTAC 3'

Se generan dos fragmentos de 24 nt y 78 nt:

GGAATTTCGCCGGCGATTATTAGG AATTCAGGCCACGTCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACGCCATGCGCGATGTTAC

Corte con EcoRI G/AATTC y SalI G/TCGAC

5’GGAATTTCGCCGGCGATTATTAGGAATTCAGGCCACGTCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACGCCATGCGCGATGTTAC 3'

Se generan tres fragmentos de 24, 13 y 65 nt

GGAATTTCGCCGGCGATTATTAGG AATTCAGGCCACG TCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACGCCATGCGCGATGTTAC

Corte con HindIII A/AGGTT y AfaI G/TAC

5’GGAATTTCGCCGGCGATTATTAGGAATTCAGGCCACGTCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACGCCATGCGCGATGTTAC 3

Se generan 5 fragmentos 45, 8, 19, 10 y 20 nt

GGAATTTCGCCGGCGATTATTAGGAATTCAGGCCACGTCGACTAG TACCGTCA AGGTTATATCTAACCCTTG TACAGGTCCG TACGCCATGCGCGATGTTAC

2 PREGUNTA: Un plásmido de 6211 pb tiene dianas de restricción XbaI en las posiciones 0, 253 y 3050. Dianas de restricción SmaI en 1024, 4331. Si cortamos el plásmido con ambas enzimas y corremos la digestión enzimática en una cromatografía de agarosa. ¿Cuál es el carril correcto?

Respuesta: pincha aquí 

3 PREGUNTA:
a) Identifica el ORF en esta secuencia de ADN

5' TATGTTTTATAAAGTCGGATATCTAACCCTTGTCACGTATTTCATGCGCGATGG 3'

b) ¿Cuántos nucleótidos codificantes tiene este gen?
c) Amplifica el gen utilizando dos primers de 6 nucleótidos cada uno. Escribe los dos primers empleados para amplificar el gen estructural
Primer A (Derecha): 5'                   3'
Primer B: (Izquierda): 5'                    3'

Respuesta: pincha aquí

4 PREGUNTA:

a) Identifica el ORF en esta secuencia de ADN

5'TATGTTTTTTAAAGTCGGATATCTAACCCTTGTCACGTATTTCATGCGCTAGGG 3'

b) ¿Cuántos nucleótidos codificantes tiene este gen?

c) Amplifica el gen utilizando dos primers de 6 nucleótidos cada uno. Escribe los dos primers empleados para amplificar el gen estructural

Primer A (Derecha): 5' 3'

Primer B: (Izquierda): 5' 3'

Respuesta: el ORF tiene 51 nucleótidos totales, nucleótidos totales tiene 48 que generarán una proteína de 16 aminoácidos.

5'ATGTTTTTTAAAGTCGGATATCTAACCCTTGTCACGTATTTCATGCGCTAG 3´

Primer A (Derecha): 5' CTAGCG 3'

Primer B: (Izquierda): 5' ATGTTT 3'

5 PREGUNTA: Partiendo de la secuencia de abajo, cuando el sistema de corrección de copia arregla la mutación o las mutaciones ¿Cuál será la secuencia resultante? ¿Qué papel juegan los metilos en todo el proceso? (La hebra de nueva síntesis es la negra) ¿Cómo afecta la mutación al diámetro del ADN? ¿Afectan todas las mutaciones por igual?

        ------------------------------------------------------------------------------------------
5´     ATTGCTATCTAGCATCGCAGCGTACGCGACGACTGCATCAGTCAT  3´
3´     TAACGATAGATGGTAGCGTCGCATGCGCTGCTGACGTCGTCAGTA 5´
        -------------------------------------------------------------------------------------------

Resultado: pincha aquí


6 PREGUNTA: Las siguientes bases nitrogenadas ¿Son purinas o pirimidinas? ¿Por qué los pares de bases nitrogenadas comprenden siempre una purina enfrentada a una pirimidina?

¿Por qué el ARN tiene uracilo? ¿Por qué en el ADN, en vez de uracilo, tenemos timina?


7 PREGUNTA:  Tenemos un cromosoma bacteriano (covalentemente cerrado y circular) formado por una cadena de ADN tipo B de 7.700.000 pares de bases. Comienza la replicación y la horquilla de replicación comprende 270.000 pares de bases. ¿Cuántos pares de bases por entrecruzamiento existen en el ADN en esta nueva configuración?

Respuesta: haz clic aquí

8 PREGUNTA:  En este fragmento de doble cadena de ADN nombra la base nitrogenada señalada con la letra C los extremos 5´y 3´ del esqueleto covalente. Las bases nitrogenadas púricas y pirimidínicas de distintas cadenas que se encuentran enfrentadas ¿Por qué tipo de enlace químico están unidas?

Respuesta: pincha aquí

9 PREGUNTA:  Tenemos un cromosoma bacteriano de 4.222.845 pares de bases. Si la DNApol tiene una procesividad (capacidad de añadir nuevos nucleótidos al extremo 3´de la cadena que se está sintetizando) de 1000 nucleótidos por segundo. ¿Cuánto tardará este cromosoma en replicarse?

Resultado: pincha aquí

10 PREGUNTA: Cuando se rompe el enlace fosfodiester de una cadena de ADN ¿Se repara por una enzima? Si es que se regenera por enzima ¿Cuál se su nombre? o por lo contrario ¿Se regenera espontáneamente?

Resultado: pincha aquí

11 PREGUNTA: Imaginemos dos bacterias imaginarias. Ambas tienen cromosomas del mismo tamaño, por ejemplo 8.000.000 de pares de bases. Si la bacteria A tiene una DNApolIII con una capacidad procesiva de 500 nt por segundo, y la bacteria B tiene una DNApolIII con una capacidad procesiva de 1000 nt por segundo. ¿Cuál de las dos va a tener más descendencia? ¿Qué trascendencia evolutiva tendrá este hecho? Imaginemos que partimos de una bacteria A y de una bacteria B. ¿Qué descendencia tendrá cada una al cabo de un día?

Respuesta: pincha aquí

12 PREGUNTA: Si tengo una cromosoma lineal de 20 millones de pares de bases con 4 orígenes de replicación. Si la DNApolIII tiene una capacidad procesiva de 1000 nt por segundo ¿Cuánto tiempo tarda este cromosoma en replicarse?

Respuesta: pincha aquí

13 PREGUNTA: Se ha cortado con PstI un plásmido bacteriano circular que contiene un gen de resistencia a la ampicilina. Tras la electroforesis se observa una banda de 20 Kb. ¿Qué deducirías de los resultados que se plantean a continuación?

a) Con EcoRI, el plásmido se corta en dos fragmentos: uno de 11.5 Kb y otro de 8.5 Kb
b) La digestión PstI+EcoRI genera tres fragmentos de: 6 Kb, 5.5 Kb y 8.5 Kb
c) El ADN del plásmido cortado con PstI se ha mezclado y ligado con fragmentos de ADN cortados con PstI. Todos los clones recombinantes son resistentes a la ampicilina.
d) Tras cortar uno de los clones recombinantes con PstI se obtienen dos fragmentos: 20 Kb y 6 Kb.
e) El clon anterior se corta con EcoRI y se obtienen 10 Kb, 8.5 Kb y 7.5 Kb. 

Respuesta

a) Al sumar los fragmentos 11.5 Kb + 8.5 Kb nos da un valor de 20 Kb. Este valor es coincidente con el fragmento generado con PstI, lo que significa que el plásmido tiene un tamaño de 20 Kb y que, por tanto, PstI lo corta una sola vez mientras que EcoRI tiene dos dianas dentro de la molécula circular.

b) Con la digestión doble podemos, ahora, obtener un mapa de restricción de esta molécula circular. Podemos deducir que el fragmento de 11.5 Kb generado por EcoRI, es cortado en dos fragmentos menores de 6 Kb y 5.5 Kb por la enzima PstI: 

c) Al cortar con PstI, el plásmido se queda en forma lineal con extremos cohesivos para ese enzima. Al poner en contacto fragmentos de ADN cortados también con PstI junto con una enzima ligasa, los fragmentos, que tienen extremos complementarios, se ligan al plásmido y la molécula recirculariza con un inserto dentro de ella, obteniendo un plásmido recombinante. Si la diana para PstI estuviera dentro del gen de la ampicilina, el inserto “rompería” este gen, por lo que quedaría inactivo y las bacterias serían sensibles a la ampicilina. Por eso, podemos deducir que la diana para PstI no se encuentra dentro del gen de resistencia a la ampicilina.

d) Al cortar de nuevo con la enzima PstI, lo que estamos haciendo es separar nuevamente el plásmido del inserto, por lo que obtenemos un fragmento de 20 Kb correspondiente al plásmido y otro de 6 Kb que sería el tamaño del fragmento clonado.

e) Al aparecer un nuevo fragmento cuando cortamos con EcoRI el plásmido recombinante, que no aparecía en el plásmido bacteriano inicial, significa que existe una nueva diana para este enzima. La diferencia entre el plásmido bacteriano inicial y el plásmido recombinante, es la presencia del inserto de 6 Kb. Por eso, deducimos que el fragmento clonado tiene una diana para EcoRI y que se encuentra situada entre las dos dianas EcoRI separadas por 11,5 Kb.

14 PREGUNTA: Un fragmento lineal de ADN de 11Kb se corta por separado con las enzimas de restricción EcoRI y HaeIII y con una mezcla de ambas obteniéndose los fragmentos indicados a continuación. EcoRI: 6Kb, 3Kb y 2Kb; HaeIII: 7Kb y 4Kb; EcoRI+HaeIII: 5Kb, 3Kb, 2Kb y 1Kb. Dibujar el mapa de restricción de este segmento de ADN.

Solución aquí

15 PREGUNTA:

5' TATGTTTTATAAAGTCGGATATCTAACCCTTGTCACGTATTTCATGCGCGATGG 3'

a) Identifica el ORF en esta secuencia de ADN
b) ¿Cuántos nucleótidos codificantes tiene este gen?
c) Amplifica el gen utilizando dos primers de 6 nucleótidos cada uno. Escribe los dos primers empleados para amplificar el gen estructural

Solución:

TATGTTTTATAAAGTCGGATATCTAACCCTTGTCACGTATTTCATGCGCGATGG

                          3´  AATATTTCAGCCTATAGATTGGGAACAGTGCATAAAGTA  5´



                                                                                                                   3´AAAGTA 5´
                           5´ TTATAAAGTCGGATATCTAACCCTTGTCACGTATTTCAT 3´

                          3´  AATATTTCAGCCTATAGATTGGGAACAGTGCATAAAGTA
                          5´  TTATAA 3´

36 nt codificantes

Primers: 5´ATGAAA 3´ y 5´TTATAA 3´

16 PREGUNTA: Si amplificamos 25 ciclos una cadena de ADN mediante PCR obtendremos 2²⁵= 33 millones de copias. Si amplificamos 25 ciclos 1000 cadenas de ADN ¿Cuántas copias obtendríamos?

Solución: 1000 veces 33 millones de copias

17 PREGUNTA: a) ¿A qué sitio (A, B o ambos) puede unirse el primer 5' CAAGG 3' para iniciar la replicación? b) Si un primer se une a la secuencia A ¿Cuál es la dirección de elongación (izquierda o derecha)? c) En la hebra de la posición A la síntesis de ADN se lleva a cabo de un modo continuo o discontinuo?. d) ¿Qué fragmento se sintetiza primero C o D? Aviso: el cuadrado negro representa a la ADNpolimerasa

Solución: a) Solo se puede unir a la secuencia B. La razón es que el extremo 3´ del primer tiene que estar a la derecha para que tenga la orientación correcta. Si te fijas, en los fragmentos C y D el cuadrado negro que representa a la ADN polimerasa está a la derecha. La ADN polimerasa siempre se sitúa en el extremo 3´del ADN. b) Izquierda c) Discontinua d) Fragmento de Okazaki D

18 PREGUNTA: En las siguientes horquillas de replicación hay un primer. Puede ser un primer de una cadena de síntesis continua o discontinua ¿Sabrías decir en los seis problemas a que cadena corresponde cada uno de esos primers de ARN? ¿Podrías decir a que extremo, 5'o 3', corresponden los marcados con un signo de interrogación?

Solución: 

19 PREGUNTA: sitúa los extremos 5’y 3’de todas las cadenas de ADN

20 PREGUNTA: Tenemos un plásmido de ADN (un cromosoma circular) de 8888 pares de bases. En un tubo vamos a poner ese plásmido y lo vamos a cortar con la enzima de restricción HindIII que corta en la posición 7777; en otro tubo cortaremos el plásmido con la enzima EcoRI, la cual tiene dianas en la posición 1111 y 3333. Finalmente, el plásmido lo cortaremos con HindIII, EcoRI y con PstI, una enzima de restricción para la cual el plásmido tiene dianas de restricción en las posiciones 222 y 2222. Cuando el ADN esté cortado lo analizaremos en una cromatografía de agarosa. Dibuja las bandas en el gel propuesto

Solución: pincha aquí

21 PREGUNTA: Si cortamos esta secuencia con la enzima de restricción XbaI  5´T/CTAGA 3´ ¿Cuántos fragmentos y de qué tamaño en nucleótidos tendremos?

5’TTACGGAATTTCGCCGGCGTCTAGAATTATTAGGAATTCAGGCCACGTCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACTCTAGAGCCATGCGCGATGTTAC 3'

Solución: 

5’TTACGGAATTTCGCCGGCGT    corte

CTAGAATTATTAGGAATTCAGGCCACGTCGACTAGTACCGTCAAGGTTATATCTAACCCTTGTACAGGTCCGTACTCTAGAGCCATGCGCGATGTTAC 3'

Dos fragmentos uno de 98 nt y otro de 20 nt.

Para repasar combinatoria: 

Combinatoria variaciones permutaciones combinaciones

22 PREGUNTA: Imaginemos que en la sopa biológica de moléculas orgánicas surgidas al azar tenemos 4 nucleótidos: adenina, citosina, guanina y uracilo. Si estos nucleótidos se ensamblan y forman una cadena de 10 nucleótidos ¿Cuántas moléculas distintas podrían formar?

Solución: en la posición 1 podría haber cuatro posibilidades, en la posición 2 podrían haber 4 posibilidades, en la posición 3 podría haber 4 posibilidades... así hasta 10. Es decir, 4x4x4x4x4x4x4x4x4x4, o lo que es lo mismo 4¹⁰ = 1.048.576

23 PREGUNTA: Imaginemos un ORF de 999 nt. El primer triplete, ATG y el último TAA. a) ¿Cuántas secuencias codificantes podría generar? b) ¿Sería el mismo número que proteínas distintas? ¿Por qué? 

Solución: ¡Atención! para calcular cuantas secuencias distintas de ADN, en donde importa la secuencia, se utilizan las variaciones con repetición que no es otra cosa que un cálculo exponencial. En el video abajo ver a partir del min 10